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新研究突破馬鈴薯自交不親和性技術瓶頸為自交系雜交育種提供全新策略

2021-07-09 13:45:58 來源：中國科學報

馬鈴薯是世界上最重要的塊莖類糧食作物，全球有13億人口以馬鈴薯為主食。與大多數谷物類糧食作物不同，馬鈴薯靠種薯繁殖。

2013年起，中國農業科學院深圳農業基因組研究所（以下簡稱基因組所）研究員黃三文團隊聯合云南師范大學（以下簡稱云師大）等團隊，發起“優薯計劃”，即以二倍體育種替代四倍體育種，以雜交種子繁殖替代薯塊繁殖。

二倍體馬鈴薯是一種自交不親和的作物，培育二倍體自交系首先要克服自交不親和。所謂自交不親和，一般是指，具有雌雄花蕊的花，其自身的花粉不能讓自己的雌蕊受精結實。

1998年，日本和美國科學家發布了一種可自交的野生馬鈴薯，并證實這是由某個基因控制的。此后，很多科學家想找到這個基因卻無功而返。

近日，《自然—通訊》在線發表了云師大和基因組所合作克隆的馬鈴薯自交親和基因Sli及其調控機制。

中國農業大學教授李天中告訴《中國科學報》：“打破自交不親和性的技術瓶頸，多代自交獲得純合自交系，利用選擇的自交系育成的優新品種雜交種子生產，一直是馬鈴薯育種家的工作目標和努力方向。”

南京農業大學作物遺傳與種質創新國家重點實驗室教授吳巨友在接受《中國科學報》采訪時說，這項成果將在創制二倍體馬鈴薯自交系、豐富其雜交親本遺傳基礎中發揮重要作用，也將為其他配子體型自交不親和性物種，如梨、蘋果等的自交親和品種選育提供新途徑。

表型難鑒定基因難克隆

1998年，日本和美國科學家合作發布了一株自交親和的野生材料，并確定了這個材料的自交親和性狀受單個位點調控。

由于前人報道馬鈴薯1號染色體上的S位點調控了自交不親和過程，所以日本科學家推測該位點通過抑制S位點起作用，將其命名為Sli，可以理解為S位點抑制子。

“在馬鈴薯中，平均每條染色體上存在3000多個編碼基因。如果把基因組當做一個寶藏，基因就相當于里面的一顆寶石。發現基因，代表知道有這顆寶石的存在；把基因初步定位在某個染色體上類似于知道這顆寶石位于寶藏的哪一部分，但并不清楚具體位置；而成功地克隆這個基因則意味著準確找到了這顆寶石。”此次發表于《自然—通訊》的論文共同通訊作者尚軼告訴《中國科學報》。

國際上多個實驗室一直在嘗試克隆Sli基因。然而，鑒定自交是否親和首先需要進行大量自交授粉工作，通過授粉后是否坐果進行判斷。

尚軼介紹，植株坐果與否受到多種環境因素影響。如果自交不親和的植株授粉時發生了串粉，就會導致坐果。比如一陣風把其他植株的花粉吹到柱頭上，或者授粉時鑷子沒有清理干凈，沾上了其他植株的花粉，都可以讓本身自交不親和的植株自花授粉后坐果。

而那些自交授粉后不坐果的，也有可能是溫度太低或者太高，或者花粉育性出了問題，而不是由于自交不親和。

“這就導致表型鑒定特別困難，且鑒定結果也不準確，給Sli基因的克隆工作帶來了很大困難。”論文第一作者、云師大助理研究員馬玲介紹，不僅表型難鑒定，前人還認為Sli基因與馬鈴薯的致死基因相連。所以當Sli位點純合后，會導致后代致死，這讓他們無法得到Sli基因的純合體。

“由于馬鈴薯自交親和的表型易受外界環境干擾，該基因一直未被克隆。”黃三文說。

神奇的偏分離現象

在含有Sli位點的馬鈴薯植株自交后代中，會出現一種偏分離現象。論文共同第一作者、嶺南現代農業科學與技術廣東省實驗室深圳分中心研究員張春芝解釋道，正常情況下雜合的基因型（A/a）自交后代中應該出現A/A、A/a、a/a三種基因型，比例分別是1：2：1。而含有Sli基因的雜合個體自交后只出現Sli/Sli和Sli/sli兩種基因型，比例為1：1，找不到sli/sli基因型的個體。

“后代在12號染色體上出現了極端的偏分離比例。”張春芝說。

盡管前人也發現了這一偏分離現象，但他們認為原因是Sli與致死基因連鎖，所以當Sli位點純合后就會導致后代致死。

“然而，我們發現偏分離是受精造成的，即只有含Sli基因的花粉才能夠完成受精，因此后代中有Sli/Sli和Sli/sli基因型，沒有sli/sli個體。”張春芝說。

于是，含有Sli基因的雜合個體自交產生的后代全部含有Sli基因，都是自交親和的。“這樣我們就不用對后代再進行繁瑣的親和表型鑒定，并利用這個特點擴大我們的后代群體用于基因定位，群體越大對基因定位幫助越大。”尚軼說。

吳巨友告訴《中國科學報》，利用后代均為自交親和表型的特點，他們將遺傳群體擴大至6624個植株，最終從花粉RNA中克隆了Sli基因。

“我們發現了配子體導致的自交不親和性，其后代均為自交親和表型，不用做表型鑒定，這樣就可以擴大遺傳定位群體數量，因而快速克隆了Sli基因。”黃三文說。

一把“萬能鑰匙”

雖然找到了馬鈴薯自交親和基因，但它究竟是如何實現這一機制的呢？

吳巨友向《中國科學報》解釋，植物自交不親和的遺傳位點稱為S位點，分別編碼雌蕊決定因子和花粉決定因子。

在分子水平上，馬鈴薯屬于配子體型自交不親和性作物，表現為花粉管在花柱中部停止生長，不能進入子房完成受精。該系統中，雌蕊的決定因子是S-RNase蛋白，它是一種細胞毒性蛋白，僅在花柱中表達，并被分泌到花柱傳導組織中；而花粉的決定因子是位于S-locus上的SLF蛋白，它們在花粉中特異表達，不能識別自身的S-RNase，因此S-RNase的毒性作用存在，表現出自交不親和。

當花粉管在花柱引導組織生長時，親和與不親和的S-RNase蛋白都可以進入花粉管。親和的S-RNase在花粉胞質中被花粉SLF蛋白識別并降解；而不親和的S-RNase被保留在胞質中發揮其毒性作用，引起花粉管的細胞程序性死亡而停止生長。

“如果認為S-RNase蛋白是雌蕊阻斷花粉管進入的‘鎖’，那么SLF蛋白就是打開這把‘鎖’的‘鑰匙’。”吳巨友說，通常，一種SLF只能識別1~2種類型的S-RNase，類似于一把鑰匙開一把鎖，如果一把鑰匙能開多把鎖，就可以產生廣泛的自交親和。

尚軼告訴《中國科學報》，他們鑒定到的Sli蛋白不是S位點上的SLF蛋白，且能識別超過10種類型的S-RNase，從而打破自交不親和性，表現出“萬能鑰匙”的作用，可廣泛應用于打破二倍體馬鈴薯的自交不親和性，對于培育馬鈴薯自交系有重要作用。

“馬鈴薯自交親和基因Sli的進化有其特殊意義，但現在還未知。”黃三文說，目前也不清楚別的作物里是否也有類似的基因存在。

李天中說，該研究突破了馬鈴薯自交不親和性技術瓶頸，為自交系雜交育種提供了全新策略，是植物自交不親和性理論研究及產業應用的成功范例。相較于傳統策略，該方法創制的自交親和馬鈴薯具有廣譜性強、效率高等優勢，為優薯計劃提供了重要工具。

該研究也為遺傳背景高度雜合、雜交育種隨機性強、多種優良性狀聚合難的其他自交不親和性園藝作物育種提供了借鑒和思路。

標簽：新研究馬鈴薯自交不親和技術自交系雜交育種